silymariinin uuttoprosessi
Silymariini, seos flavonolignaaneja, joilla on monia farmakologisia vaikutuksia, saadaan maitohampaan (Silybum marianum L. Gaertner) hedelmistä. Ohdakeiden hedelmien korkean lipidipitoisuuden vuoksi Euroopan farmakopea suosittelee kaksivaiheista uuttoa. Ensinnäkin hedelmiä rasvataan 6 h käyttäen n-heksaania; toiseksi silymariini uutetaan metanolilla vielä 5 tuntia.
Esitetyt tiedot osoittavat, että tämä erittäin pitkä perinteinen Soxhlet-uuttoprosessi voidaan lyhentää muutamaan minuuttiin käyttämällä paineistettua nesteuuttoa (PLE). PLE mahdollistaa myös perinteisessä menettelyssä vaaditun rasvan poistamisen, mikä yksinkertaistaa silymariinin uuttomenettelyä ja estää rasvan aiheuttaman silymariinihäviön. Optimoiduissa uuttolosuhteissa saadut PLE-saannot ovat selvästi parempia kuin ne, jotka on saatu farmakopean suosittelemalla Soxhlet-uuttomenettelyllä.
Silykristiinin, silydianiinin, silybiini A: n, silybiini B: n, isosilybiini A: n ja isosilybiini B: n saannot asetonissa ovat vastaavasti 3,3, 6,9, 3,3, 5,1, 2,6 ja 1,5 mg / g rasvattomia hedelmiä. 5 tunnin Soxhlet-uutto metanolilla rasvattomista hedelmistä antaa vain ~ 72% silymariinimäärästä, joka saadaan 10 minuutin PLE: ssä 125 ° C: ssa.
Mikä on Silybum?
Silybum marianum L.Gaertner, jota kutsutaan yleisesti nimellämaidon ohdake, siunattu maitohamppu, Marian Thistle, Mary Thistle tai Saint Mary' s Thistle on Asteraceae-perheen yksivuotinen tai kaksivuotinen kasvi. Alun perin Etelä-Euroopassa ja Aasiassa kasvanut kasvi löytyy nyt kaikkialta maailmasta (1). Tätä hankalaa rikkaruohoa viljellään tällä hetkellä lääkekasvina ja se on yksi tärkeimmistä lääkekasveista Euroopassa.
Maidon ohdaketta on käytetty lääkinnällisiin tarkoituksiin yli 2000 vuoden ajan, yleisimmin maksasairauden (kirroosi ja hepatiitti) sekä maksan suojaamiseksi myrkyllisiltä aineilta (2–5). Viimeaikaisen tutkimuksen kiinnostus tätä laitosta kohtaan on stimuloinut tutkimuksia, jotka osoittavat sen poikkeuksellisen korkean kasvaintenvastaisen aktiivisuuden. Kasviuutteita tutkitaan nyt voimakkaasti syövän kokeellisessa kemoterapiassa ja kemoterapian sivuvaikutusten lieventämisessä (6). Viimeaikaiset raportit ovat osoittaneet, että tämän kasvin uutteille on ominaista myös monet muut farmakologiset vaikutukset, kuten tulehdusta ja antifibroottisia vaikutuksia (2, 7, 8).
Silymariini, seos flavonolignaaneja, joilla on monia farmakologisia vaikutuksia, saadaan maitohampaan (Silybum marianum L. Gaertner) siemenistä. Silymariiniuutossa toistaiseksi käytetyt yleiset menetelmät perustuvat pääasiassa hitaisiin korkean lämpötilan liuotinuutto menetelmiin. Näihin tekniikoihin liittyvät epäkohdat ovat johtaneet uusien vaihtoehtoisten uuttoprosessien etsimiseen, jotka voivat lisäksi parantaasilymariiniuutteetlaatu. Viimeksi mainittu on erityisen tärkeä silymariinin käytön suhteen. Saadut silymariiniuutteet voivat itse asiassa sisältää myrkyllisiä orgaanisia tähteitä, jotka on poistettava kuluttajien hyväksyttävyyden saavuttamiseksi.
Yrittäessään parantaa silymariinin uuttamisprosessia ja tehdä siitä tehokkaampi ja ympäristöystävällisempi, äskettäin mikroaaltouuni-avusteinen liuotinuutto, ultraääni-avusteinen liuotinuutto, paineistettu nesteuutto, entsyymiavusteinen uuttaminen, ylikriittinen nesteuutto ja erityisesti alikriittinen vesiuutus tunnetaan myös nimellä paineistettu kuuman veden uuttomenetelmät on kehitetty ja sovellettu.
Materiaalit ja menetelmät
Kasvimateriaali
S. marianum L. Gaertnerin kuivatut hedelmät ostettiin paikallisesta apteekista (Lublin, Puola) syksyllä 2011. Riittävän suuri edustava näyte kasvimateriaalista (noin 500 g) jauhettiin ja seulottiin partikkelikoon 0,4 saamiseksi. mm. Uuttamiseen käytettiin tarkasti punnittuja osia materiaalista.
Materiaalit ja reagenssit
S. marianum L. Gaertnerin ja silybiini B: n standardoitu kuivauute (puhtausaste 98%), standardina käytetty, ostettiin Sigma-Aldrichilta, Puolasta. Asetoni, etyyliasetaatti, fosforihappo, n-heksaani (kaikki analyyttistä reagenssilaatua) ja metanoli (analyyttinen reagenssilaatu ja HPLC-laatu) ostettiin Puolan kemiantehtaalta (POCh, Gliwice, Puola). Vesi puhdistettiin Millipore-yhtiön Milli-Q-järjestelmällä (Millipore, Bedford, MA, USA). Neutraalia lasia, joka oli saatu lahjana paikalliselta lasitehtaalta (fraktio 0,4–0,6 mm), levitettiin dispergointiaineena PLE-soluun.
Paineistettu nesteuutto
PLE suoritettiin Dionex ASE200 -laitteella (Dionex Corp., Sunnyvale, CA, USA). Kasvimateriaali (0,5 g) sekoitettiin inertin materiaalin (neutraali lasi) kanssa ja laitettiin 22 ml: n ruostumattomasta teräksestä valmistettuun uuttokennoon, joka sisälsi suodatinpaperia pohjassa. Toinen ympyrä suodatinpaperia sijoitettiin uuttokennon yläosaan. Lopuksi kenno suljettiin tiukasti ja laitettiin lämmitysuuniin.
Solun sisältö uutettiin 60 barin käyttöpaineessa. Prosessin lopussa uutettu näyte huuhdeltiin käyttämällä liuotintilavuutta, joka oli 60% uuttokennon tilavuudesta. Lopuksi näytettä huuhdottiin 60 sekunnin ajan käyttämällä paineistettua typpeä (150 psi) ja uute kerättiin 60 ml: n lasipulloon, jossa oli teflonilla päällystetty kumikorkki. Kerätyn uutteen tilavuus oli 25 - 31 ml, riippuen uuttokennon pakkaustiheydestä. Saatu uute siirrettiin 50 ml: n mittapulloon ja täytettiin tilavuuteensa sopivaa liuotintyyppiä käyttäen. Kolme riippumatonta uuttoa suoritettiin samoissa olosuhteissa. Ajojen välillä järjestelmä pestiin sopivalla uuttoliuottimella.
Tutkittavat PLE-parametrit olivat liuotintyyppi (metanoli, asetoni ja etyyliasetaatti), lämpötila (50, 75, 100, 125 ja 150 ° C), aika (5, 10, 15 ja 20 min) ja uuttosyklien lukumäärä (1 –5). PLE-rasvanpoistoprosessia varten käytettiin n-heksaania liuottimena, ja tutkittavat parametrit olivat lämpötila (50 ja 100 ° C) ja lipidien poiston aika (5 ja 10 min). Asetoni- ja etyyliasetaattiuutteet haihdutettiin kuiviin tyhjössä ja liuotettiin uudelleen metanoliin ennen kromatografista analyysiä.
Soxhlet-uutto
Uuttavat uutteet Soxhlet-laitteessa suoritettiin käyttämällä 2,0 g: n annoksia materiaalia. Tarkkaan punnitut näytteet siirrettiin paperikokoon. Ladattu sormustin työnnettiin 100 ml: n Soxhlet-uuttimeen. Uutot suoritettiin kaksivaiheisessa prosessissa (n=3). Menettelyn ensimmäisessä vaiheessa kasvimateriaalia rasvattiin 6 tuntia käyttäen 75 ml n-heksaania. Toisessa silymariinia uutettiin 5 tunnin ajan 75 ml: lla metanolia. Huoneenlämpötilaan jäähdyttämisen jälkeen saatu uute siirrettiin 100 ml: n mittapulloon, joka sitten täytettiin tilavuuteensa asti metanolilla. Suoritettiin kolme riippumatonta uuttoa.
Uutteiden kromatografinen analyysi
HPLC-mittaukset suoritettiin Dionex Liquid Chromatographilla (Dionex Corp.), joka koostui kromatografiakotelosta (LC20), joka sisälsi PEEK-automaattisen injektioventtiilin, joka oli varustettu 10 μl näytesilmukalla, gradienttipumpulla (GP50), absorbanssin detektorilla (AD25). ja fotodiodiryhmäilmaisimen (PDA100). Koko kromatografiajärjestelmä oli PeakNet6-tiedonkeruujärjestelmän valvonnassa. Kromatografiset erotukset suoritettiin 40 ° C: ssa käyttäen Prodigy ODS-2 -pylvästä (5 μm, 250 x 4,6 mm, ID) (Phenomenex, Torrance, CA, USA). Liikkuva faasi A oli metanolin ja fosforihapon vesiliuoksen seos, joka sisälsi 0,5 ml 75-prosenttista fosforihappoa 100 ml: ssa liuosta (35: 65, tilavuus / tilavuus). Liikkuva faasi B oli metanolin ja fosforihapon vesiliuoksen seos, joka sisälsi 0,5 ml 75-prosenttista fosforihappoa 100 ml: ssa liuosta (50: 50, tilavuus / tilavuus). Virtausnopeus oli 0,8 ml / min. Analyysit suoritettiin liikkuvan faasin gradientissa, jossa B: n prosenttiosuus A: ssa vaihteli seuraavasti: alkupitoisuus, 0% B; 28 min, 100% B; 35 min, 100% B, 36 min 0% B. Ennen seuraavaa analyysia pylväs tasapainotettiin käyttämällä 0% B: tä sisältävää liikkuvaa faasia 20 minuutin ajan. Kukin uute analysoitiin HPLC: llä kolme kertaa. Aallonpituus flavonolignaanien havaitsemiseksi asetettiin 288 nm: iin, ja UV-Vis-spektrit 210-500 nm kirjattiin myös piikin karakterisointia varten.
Uutteiden kvalitatiivinen analyysi tehtiin vertaamalla piikkien retentioaikoja ja niiden UV – Vis-spektrejä uutteissa suhteessa standardoidun kuivan silymariininäytteen pitoisuuksiin. Standardoidun kuivan silymariiniliuoksen valmistamiseksi 0,02 g: n annos näytettä, joka sisälsi 5,0 mg silybiini A + B, liuotettiin 50 ml: aan metanolia. Silykristiinin, silydianiinin, silybiini A: n, silybiini B: n, isosilybiini A: n ja B: n piikit ilmestyivät vastaavasti retentioajoina 15,1, 17,4, 27,5, 29,1, 33,6 ja 34,8 minuuttia. Kvantitatiivinen analyysi perustui silybiini B -standardiin ja käytettiin ulkoista standardimenetelmää. Yhdisteen viidestä konsentraatiosta muodostettiin kalibrointikäyrä pitoisuusalueella 0,1–1,0 mg / ml. Suoritettiin kolme piikkipinta-alan mittausta kullekin standardiliuoksen konsentraatiolle. Saadun kalibrointikäyrän ominaisparametrit olivat seuraavat: kaltevuus, 0,516 ja leikkauspiste, 0,003. Kalibrointikäyrän todettiin olevan lineaarinen testatulla pitoisuusalueella. Korrelaatiokertoimen todettiin olevan> 0,995. Koska silykristiinin, silydianiinin, silybiini A: n, isosilybiini A: n ja B: n standardien hankkiminen on vaikeaa, näiden yhdisteiden määrät laskettiin liittämällä niiden kromatografiset vasteet silybiini B: n kalibrointikäyrään.
Tilastollinen analyysi
Kaikki tiedot ilmaistaan keskiarvona ± keskihajonta (SD). Varianssianalyysiä (ANOVA) ja F-testiä käytettiin PLE-olosuhteiden vaikutuksen arviointiin silymariinin saantoon. Keskiarvoja pidettiin merkittävästi erilaisina, kun vertailtujen parametrien tulos poikkesi P=0,05 -merkitsevyystasolla. Jokaisen Fisherin kertoimen merkityksen tarkistamiseksi käytettiin P-arvoja.
Tulokset
Kuvassa 1a on tyypillinen kromatogrammi PLE-uutteesta, joka on saatu S. marianum L. Gaertnerin hedelmistä, kun taas kuvassa 1b on kromatogrammi silymariiniuutosta maitohohdeliuoksesta, joka on valmistettu liuottamalla S. marianum L. Gaertnerin standardoitu kuiva uute metanoliin (1 mg / ml). PLE- tai Soxhlet-uutteiden kromatogrammien analysointi standardoidun liuoksen (retentioajat, UV – Vis-spektrit ja huippupuhdistusindeksi) kromatogrammien kanssa osoitti, että käytetyt kromatografiset olosuhteet mahdollistavat tutkittujen yhdisteiden riittävän erotuksen, piikit numeroituna 1-6, näytematriisikomponenteista. Huiput tunnistettiin seuraavasti: (1) silykristiini, (2) silydianiini, (3) silybiini A, (4) silybiini B, (5) isosilybiini A ja (6) isosilybiini B.
Kuinka poistaa ohdake maitot?
Toisin kuin useimmat yrtit, maitohampunsiemenet eivät ole kovin uutteita vedessä, joten älä yritä tehdä niistä kupillista teetä! Syötä sen sijaan tuoreet jauhetut siemenet tai hanki laadukas kapseli. Jos käytät siemeniä, osta ne kokonaisina ja jauhaa ne sitten tarpeen mukaan (teen kahvimyllyllä karkeaa jauhetta). Siemenet maistuvat öljyisiltä, makealta ja katkerilta kerralla - ehkä ne ovat hankittu maku, mutta eivät ollenkaan epämiellyttäviä. Aloita ottamalla 1/2 - 1 rkl päivässä ripoteltuna ruokaan ja katso, miltä se tuntuu sinulle, säätämällä määrää tarpeen mukaan.
Ainekset
1 kuppi haaleaa vettä
1 kuppi 100 todistettua alkoholia käytän vodkaa
¾ - 1 kuppi maitohampunsiemeniä jauhetaan mahdollisuuksien mukaan
Ohjeet
Steriloi käytetty Mason-purkki asettamalla se kiehuvaan veteen noin 10 minuutiksi tai asettamalla se uunin telineeseen noin 250 asteen lämpötilaan 15 minuutiksi.
Kaada kaikki ainesosat Mason-purkkiin.
Aseta uusi kansi purkkiin ja kierrä se tiukasti kiinni renkaalla.
Ravista purkkia voimakkaasti noin minuutin ajan.
Laita purkki viileään pimeään viiteen viikkoon.
Ravista purkkia päivittäin varmistaaksesi, että maitohampun siemenet eivät kellu huipulle, ja että ne saavat täydellisen alkoholin ja veden.
Määritä määritelty viikkojen määrä maitohamppu pois nesteestä hienosilmäisen siivilän läpi - pitäen neste. Jos sinulla ei ole hienojakoista siivilää, pienennä aukkojen kokoa pienellä siivilällä ja / tai vuoraa siivilä useilla kahvisuodattimilla.
Kuinka kauan ohdake tulee voimaan?
Maidon ohdake siemen saattaa suojata maksasoluja myrkyllisiltä kemikaaleilta ja huumeilta. Sillä näyttää myös olevan verensokeria alentavia, antioksidantteja ja anti-inflammatorisia vaikutuksia.
Oksidatiivisen stressin parametrien paraneminen havaittiin johdonmukaisesti kuuden kuukauden&# 39: ssä; hoidon kesto erikoistuneella maitohampaan jakelujärjestelmällä (2). Oksidatiivisen stressimallin parantuminen on vastuussa insuliinin signaloinnin ja maksasolujen toiminnan parantumisesta.
Kuinka kauan maitohampaan pitäisi kestää? (Maidon ohdake ANNOSTUS)
Maidon ohdaketta pidetään turvallisena annoksina 420 mg / vrk suun kautta jaettuina annoksina enintään 41 kuukauden ajan. Yksi lähde ehdottaa 12-15 g kuivahedelmien päivittäisiä annoksia dyspepsiaan ja sappijärjestelmän häiriöihin, kun taas uutetta, joka sisältää 200-400 mg silymariinia päivässä, pidetään tehokkaana erilaisissa maksan häiriöissä.
Maidon ohdake Edut
1. Tukee maksan terveyttä
Yksi ohdakeiden yleisimmistä käyttötavoista on maksaongelmien hoito. Vuonna 2016 tehdyssä tutkimuksessa todettiin, että maitohamppu paransi ruokavalion aiheuttamia maksavaurioita hiirillä. Lisää todisteita tarvitaan sen osoittamiseksi, että maitohamppu hyödyttää ihmisen maksa samalla tavalla, mutta tutkijat teorioivat sen. Maidon ohdakkeen vaikuttava aine, silymariini, toimii antioksidanttina vähentämällä vapaiden radikaalien tuotantoa. Tutkijoiden mielestä tämä luo detoksifioivan vaikutuksen, minkä vuoksi se on maidon ohdake, mikä voi olla hyödyllistä maksaongelmille.
Ennen kuin lisätutkimuksia on tehty, maitohohdetta ei kuitenkaan suositella ensisijaisena hoitovaihtoehtona maksavaivoissa. Mutta se voi olla hyödyllinen täydentävä hoito kokeilla.
2. Edistää ihon terveyttä
Maidon ohdakeöljyä voidaan käyttää paikallisesti ihon terveyden parantamiseen.
Maidon ohdake voi auttaa edistämään terveellistä ihoa. Vuoden 2015 tutkimuksessa todettiin, että maitohamppu auttoi parantamaan tulehduksellisia iho-olosuhteita hiirien iholle levitettynä.
Maidon ohdakkeella todettiin myös antioksidantti- ja ikääntymisen vaikutuksia ihmisen ihosoluihin laboratorioympäristössä toisessa tutkimuksessa.
Lisätutkimuksia ihmisistä tarvitaan sen selvittämiseksi, mitä etuja henkilö voi odottaa maidon ohdakkeen levittämisestä iholle.
3. Vähentää kolesterolia
Korkea kolesteroli voi johtaa sydämen terveysongelmiin ja lisätä aivohalvauksen mahdollisuutta.
Vuonna 2006 tehdyn tutkimuksen mukaan maitohohnalla voi olla tärkeä rooli kolesterolitason pitämisessä. Siinä todettiin, että kolesterolitasot olivat alhaisemmat ihmisillä, jotka käyttivät maitohohdetta diabeteksen hoitoon kuin lumelääkettä saaneet.
4. Tukee laihtumista
Alkuperäiset eläintutkimukset, jotka tehtiin vuonna 2016, havaitsivat, että silymariini aiheutti laihtumista hiirillä, joille annettiin ruokavaliota, joka oli tarkoitettu aiheuttamaan painonnousua.
Tämä viittaa siihen, että maitohamppu voi olla hyödyllinen niille, jotka haluavat laihtua. Tämän vahvistamiseksi tarvitaan lisää tutkimuksia maitohampaan vaikutuksista ihmisen laihtumiseen.
5. Vähentää insuliiniresistenssiä
Hiirillä tehdyssä tutkimuksessa todettiin, että maitohohnauute auttoi vähentämään insuliiniresistenssiä. Insuliiniresistenssi on ongelma tyypin 2 diabetesta sairastaville.
Vaikka tämä tutkimus viittaa siihen, että maitohohnalla voi olla merkitystä diabeteksen hallinnassa, tarvitaan lisää tutkimuksia sen varmistamiseksi, vähentääkö maitohohma insuliiniresistenssiä ja tukeekö diabeteksen hallintaa.
6. Parantaa allergisen astman oireita
Maidon ohdakkeen vaikuttava aine voi auttaa vähentämään tulehdusta. Vuonna 2012 tehdyssä tutkimuksessa havaittiin, että silymariini auttoi suojautumaan tulehdukselta allergista astmaa sairastavien hiirten hengitysteissä.
Lisätutkimuksia tarvitaan sen selvittämiseksi, hyötyykö silymariini astman oireista ihmisillä.
7. Rajoittaa syövän leviämistä
Maidon ohdake voi auttaa estämään tietyntyyppisten syöpien leviämisen. Vuoden 2016 katsauksessa todettiin, että maitohampurauute esti paksusuolen syövän syöpäsolujen kasvua.
Lisää tutkimusta tarvitaan sen selvittämiseksi, miten maitohohdetta voidaan käyttää syöpää vastaan.
8. Tukee luiden terveyttä
Maidon ohdake tee voi auttaa estämään estrogeenin puutteesta johtuvaa luukatoa. Maidon ohdake voi olla tärkeä rooli luun terveyden tukemisessa. Vuonna 2013 tehdyssä tutkimuksessa todettiin, että maitohamppu auttoi estämään luukadon.Tutkimuksessa tarkasteltiin erityisesti estrogeenipuutoksesta johtuvaa luukatoa. Ei ole vielä selvää, onko maitohamppu yhtä hyödyllinen luiden häviämiselle, jolla on eri syy. Lisätutkimuksia tarvitaan, ennen kuin on turvallista päätellä, että maitohamppu tukee luiden terveyttä ihmisillä.
9. Parantaa kognitiota
Vuonna 2015 tehdyssä tutkimuksessa todettiin, että maitohamppu lisäsi vastustuskykyä oksidatiiviselle stressille. Oksidatiivinen stressi on mahdollinen syy Alzheimerin tautiin.
Tällä tavoin maitohamppu voi auttaa parantamaan kognitiota ja hoitamaan mielessä vaikuttavia rappeuttavia tiloja. Lisää tutkimuksia ihmisistä tarvitaan vahvistamaan maitohohden vaikutukset kognitioon.
10. Parantaa immuunijärjestelmää
Maidon ohdake voi auttaa vahvistamaan henkilön&# 39: n immuunivastetta ja auttaa heitä torjumaan infektioita.
Eläinmallia koskevassa vuonna 2016 tehdyssä tutkimuksessa todettiin, että maitohohnauute paransi immuniteettia kulutettuna. Vanhemmassa tutkimuksessa todettiin, että maitohohdekasvulla oli positiivinen vaikutus ihmisen immuunivasteeseen.
Tarvitaan lisää tutkimuksia ihmisosallistujien kanssa, ennen kuin tiedemiehet voivat sanoa varmuudella, että maitohake parantaa ihmisen immuunijärjestelmää.
Maidon ohdake haittavaikutuksia
Maidon ohdakkeella näyttää olevan vain vähän sivuvaikutuksia, vaikka sitä otettaisiin useita vuosia. Joillakin ihmisillä on pahoinvointia, ripulia, kutinaa ja turvotusta.
Suuremman ohdakejauheen osalta ota yhteyttä osoitteeseenherbext@undersun.com.cn
Viitteet: https: //academic.oup.com/chromsci/article/53/2/366/307144
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128093801000152
https://www.cambridgenaturals.com/blog/milk-thistle-food-for-the-liver
https://www.survivalsullivan.com/milk-thistle-extract/
https://www.webmd.com/digestive-disorders/milk-thistle-benefits-and-side-effects
https://www.medicalnewstoday.com/articles/320362#how-to-use-milk-thistle
